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免疫印迹主要试剂

Western免疫印迹(WesternBlot)是往膜上转移蛋白质,然后利用抗体进行检测。可通过融合部分的抗体对新基因的表达产物进行检测。可用相应抗体作为一抗对已知表达蛋白进行检测。


主要试剂

1、5%(w/v)脱脂奶粉。


2、在磷酸缓冲盐溶液(PBS)中溶解NaN30.02%叠氮钠(有毒,戴手套操作)。


3、Tris缓冲盐溶液(TBS):


NaCl 500mmol/L,Tris/HCL(pH7.5)20mmol/L。


4、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。


5、过氧化物酶标记的第二抗体。


6、NBT(溶于70%二甲基甲酰胺,75mg/ml)。


7.jpg


7、BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺,50mg/ml)。


8、Tris-HCL(pH9.5)100mmol/L。


9、NaCl100mmol/L。


10、EDTA5mmol/L,Tris-HCL(pH7.5)50mmol/L。


11、丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺:

含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N,N’-亚甲双丙烯酰胺储存液的配制应当使用温热(对溶解双丙稀酰胺有利)的去离子水。取1gN,N-亚甲叉双丙稀酰胺,29g丙稀酰胺,将水加入到100毫升。将其在棕色瓶中,4℃避光保存。由于碱催化或者光催化会发生脱氨基反应,因此必须确保PH不高于7.0。如果出现沉淀,可以过滤,若使用期超过两个月,就必须重新配制。


12.十二烷基硫酸钠SDS溶液:

10%(w/v)0.1gSDS使用1mlH2O去离子水配制,在室温下保存。


13、分离胶缓冲液:

48ml 1mol/LHCL和1.5mmol/L Tris-HCL(pH8.8): 18.15g Tris混合,加水稀释,使终体积到100ml,过滤后在40摄氏度下保存。


14、浓缩胶缓冲液:

在40ml H2O中溶解0.5mmol/L Tris-HCL(pH6.8):6.05g Tris,使用大约48ml 1mol/LHCL将pH调至6.8,加水稀释,使终体积到100ml,过滤后在40摄氏度下保存。必须使用Tris碱来制备

这两种缓冲液,然后使用HCL来对PH值进行调节。


15、TEMED原溶液:

过硫酸铵在N,N,N’N’四甲基乙二胺的催化作用下使自由基形成,从而使得两种丙稀酰胺加速聚合。若PH太低,则会抑制聚合反应。丙稀酰胺聚合所必须的两种自由基由10%(w/v)过硫酸胺溶液来提供。临用前配制数毫升去离子水。


16、SDS-PAGE加样缓冲液:

1.6ml 0.05%溴酚蓝,3.2ml巯基乙醇,12.8ml 10%SDS,6.4ml甘油,8ml pH6.8 0.5mol/LTris缓冲液,加32ml水混匀备用。与蛋白质根据1:1或1:2比例混合,在沸水终煮3min混匀后再上样,通常是20-25ul,总蛋白量100μg。


17、Tris-甘氨酸电泳缓冲液:

10gSDS,188g甘氨酸,30.3gTris用蒸馏水溶解至1000ml,使0.25mol/L Tris-1.92mol/L 甘氨酸电极缓冲液得到。在临用前稀释10倍。


18、转移缓冲液:

对1L转移缓冲液进行配制,需要对0.37gSDS,5.8gTris碱以及2.9g甘氨酸进行称取,并且将200ml甲醇加入,加水至总量1L。


19、丽春红染液储存液:

30g磺基水杨酸,30g三lv乙酸以及2g丽春红S加水至100ml,使用时将上述储存液稀释10倍,就使成丽春红S使用液制成,在使用后将其废弃。


2019-08-23 17:37:44 浏览次数:132次

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