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免疫印迹分类和原理

Western免疫印迹(WesternBlot)是往膜上转移蛋白质,然后利用抗体进行检测。可通过融合部分的抗体对新基因的表达产物进行检测。可用相应抗体作为一抗对已知表达蛋白进行检测。


分类

主要有以下几种western显色的方法:

1.底物荧光ECF

2.底物DAB呈色


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3.放射自显影

4.底物化学发光ECL

底物DAB呈色以及底物化学发光ECL为如今比较常用的有底物,体同水平和实验条件的是用第一种方法,目前为止,用底物化学发光ECL一般发表在文章中。只需购买现成的试剂盒能够实现,有着比较简单便捷的操作。将过氧化物+鲁米诺作为反应底物,如果和HRP相遇就会发光,能够曝光胶片,就能够将条带洗出,以下就是它的原理。


原理

Western Blot类似于Southern或Northern杂交方法,然而其采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,用标记的二抗来“显色”,抗体为“探针”,蛋白质为被检测物。经过PAGE分离的蛋白质样品往固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上转移,固相载体以非共价键形式来进行蛋白质的吸附,并且可以使其生物学活性和电泳分离的多肽类型保持不变。抗原使用固相载体上的蛋白质或多,和对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过放射自显影或者底物显色来对电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分进行检测。该技术也在蛋白水平的表达的检测方面得到广泛地应用。


2019-08-23 17:32:34 浏览次数:116次

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